TECNOLOGIE BIOCHIMICHE E CELLULARI
Anno accademico e docente
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- English course description
- Anno accademico
- 2022/2023
- Docente
- MONICA BORGATTI
- Crediti formativi
- 6
- Percorso
- BIOTECNOLOGIE FARMACEUTICHE
- Periodo didattico
- Secondo Semestre
- SSD
- BIO/10
Obiettivi formativi
- Gli obiettivi formativi del corso consistono nell’acquisizione dei principi teorici e la conoscenza dei relativi campi di applicazione nell’ambito delle principali metodologie biochimiche e cellulari applicate in particolare allo studio delle proteine e delle interazioni biomolecolari e cellulari.
In particolare le conoscenze che verranno acquisite riguardano: i metodi che si possono impiegare per produrre e purificare le proteine ricombinanti; le tecniche di analisi delle proteine ricombinanti in termini di composizione amminoacidica, struttura primaria, concentrazione, interazioni con altre biomolecole (acidi nucleici, anticorpi, fattori di trascrizione, ecc.); i tipi di colture cellulari, come si coltivano, come si osservano; le principali caratteristiche e procedure per la coltura di cellule staminali embrionali e iPSCs; i radioisotopi e le loro principali applicazioni in biologia molecolare e cellulare.
Le abilità acquisite mediante tale corso teorico prevedono il sapere di quali: organismi ospite sono utili per la produzione di proteine ricombinanti impiegate in campo terapeutico e di ricerca; metodi sono impiegati per purificare e caratterizzare le proteine e relative interazioni bio-molecolari in base alle loro caratteristiche chimico-fisiche e biologiche; modelli cellulari si possono usare nel campo della ricerca applicata e di base e relative caratteristiche. Prerequisiti
- E’ necessario aver acquisito le conoscenze di base di chimica, biochimica e biologia molecolare.
Nessuna propedeuticità. Contenuti del corso
- Il corso prevede 48 ore di didattica frontale.
Durante il corso saranno affrontate le seguenti tematiche:
-Metodi per la produzione delle proteine ricombinanti: strategie di clonaggio di sequenze codificanti, sistemi per l’espressione delle proteine ricombinanti, proteine di fusione (6 ore).
-Metodi per la purificazione proteine (8 ore): tecniche di separazione (estrazione di proteine da fonte biologica; metodi di frazionamento di miscele proteiche; tecniche cromatografiche) e applicazioni in biomedicina.
-Metodi per l’analisi di proteine (16 ore): elettroforesi (cellulosa acetato, gel di poliacrilammide: SDS-PAGE; saggio EMSA con radiosotopi e non; footprinting; gel bidimensionali; elettroforesi capillare), dosaggi quantitativi (metodi spettrometrici e colorimetrici), tecniche immunochimiche (anticorpi policlonali e monoclonali; dosaggio radioimmunologico (RIA); Test ELISA e applicazioni, saggio ELISPOT e applicazioni; Tecnologia Luminex; Western blotting).
-Tecnologie biochimiche per la quantificazione e analisi delle interazioni molecolari (biosensori) (2 ore).
-Principi di base per lavorare con cellule e tessuti (16 ore): isolamento di cellule, visualizzazione di cellule e molecole, colture immortalizzate e trasformate, colture primarie, conservazione e mantenimento delle colture cellulari, trattamenti di cellule per test farmacologici, citofluorimetria a flusso e analisi del ciclo cellulare e dell’apoptosi, analisi su singola cellula, esame emocromocitometrico con formula leucocitaria, cellule staminali embrionali e iPSCs, biobanche cellulari.
Le ore riportate per ciascun argomento sono indicative. Metodi didattici
- Il corso è strutturato in lezioni teoriche frontali per un totale di 48 ore di lezione (6 CFU). Le lezioni si svolgono settimanalmente in aula con l’utilizzo di diapositive su power-point e per la miglior comprensione delle nozioni, anche della lavagna in dotazione nelle aule.
Modalità di verifica dell'apprendimento
- L’esame è scritto e basato su test a risposta multipla con risposte chiuse costituito da 17 quesiti da due punti per una durata pari a 25 minuti.
L’esame viene superato con il punteggio di 18/30.
Per gli studenti DSA verrà valutata singolarmente la modalità di svolgimento della prova. Testi di riferimento
- Testi consigliati:
-Metodologie Biochimiche, Maria Carmela Bonaccorsi, Roberto Contestabile, Martino Di Salvo. Casa Editrice Ambrosiana. Distribuzione esclusiva Zanichelli (2012).
-Biochimica Applicata, ¿Monica Stoppini, Vittorio Bellotti. Edises (2012). ¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿¿
-Metodologie di base per le scienze biomolecolari, Rob Reed, David Holmes, Jonathan Weyers, Allan Jones. Zanichelli Editore (2002).
-Biotecnologie molecolari, Terry A. Brown. Zanichelli Editore (2007).
-Biologia molecolare della cellula, Bruce Alberts, Alexander Johnson, Julian Lewis, Martin Raff, Keith Roberts, Peter Walter, Zanichelli Editore (2009).
